代理優(yōu)勢(shì)品牌：tedpella 、Transgenomics(IDT)  突變檢測(cè)試劑盒 、mattek 培養(yǎng)皿  、Megazyme 試劑盒、Avanti  標(biāo)準(zhǔn)品、Alzet 滲透壓泵、 DSHB抗體、moltox 菌株、Toxin Technology 毒素、Jena Bioscience、 Goldbio、teknova培養(yǎng)基、Altogen Biosystems   轉(zhuǎn)染試劑、Scientific Commodities  PE管、Coriell Institute DNA和細(xì)胞 、List毒素、BrainBits 培養(yǎng)基、Spectrum 膜、Neuromab 抗體 、BBI solutions膠體金 、braintree scientific 耗材pe管、AK Scientific抑制劑等、sutter 玻璃電極管、Reaschdiets小鼠食料

我們公司zui大優(yōu)勢(shì)是強(qiáng)大的采購(gòu)：

  上海鼎桑生物科技有限公司一家專注于生命科學(xué)的科技企業(yè)，由在國(guó)內(nèi)科研試劑領(lǐng)域有著豐富從業(yè)經(jīng)驗(yàn)的技術(shù)團(tuán)隊(duì)和管理團(tuán)隊(duì)組建而成，專營(yíng)進(jìn)口生物試劑，科學(xué)儀器，實(shí)驗(yàn)消耗品等。
       公司將不斷把上優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品引入國(guó)內(nèi)市場(chǎng)，滿足客戶的需求，公司也將緊跟生命科學(xué)的發(fā)展，為廣大科研工作者探索生命科學(xué)的奧秘奉獻(xiàn)綿薄之力.

POLYSCIENCES上海鼎桑代理

POLYSCIENCES上海鼎桑代理

美國(guó)POLYSCIENCES公司成立于1961年，主要生產(chǎn)和經(jīng)營(yíng)LIFE SCIENCES生命科學(xué)（膠體金,不含甲醛的甲醇等），病理學(xué)和顯鏡學(xué) 微球和粒子和磁珠各種單體和聚體等產(chǎn)品。polysciences公司是世界上zui大zui全的23966上海鼎桑代理 多聚化合物供應(yīng)商,同時(shí)是世界*的免疫學(xué),組織化學(xué)試劑耗材供應(yīng)商.

上海鼎桑polysciences 23966大量現(xiàn)貨供應(yīng)

轉(zhuǎn)染試劑線性PEI溶液的配制（1mg/ml）

聚乙烯亞胺（Polyethylenimine，PEI）是聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽(yáng)離子電荷密度的有機(jī)大分子，每相隔二個(gè)碳個(gè)原子，即每“第三個(gè)原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子，使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何pH下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿”(proton sponge)體。PEI，可用作轉(zhuǎn)染試劑，它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞。有實(shí)驗(yàn)證明，分子量為25000的線性PEI即Polysciences 23966轉(zhuǎn)染效率zui高。

下面將主要介紹polysciences 線性PEI(#23966)的產(chǎn)品特性及其溶液的配制過(guò)程。

1. 產(chǎn)品特性:

產(chǎn)品名稱：線性聚乙烯亞胺(PEI)

2. 溶液配制

此指導(dǎo)說(shuō)明書(shū)是經(jīng)polysciences公司研究，測(cè)試及其客戶反饋的后編寫(xiě)的。下面推薦一種簡(jiǎn)單適用而的方法，講述如何配制濃度為1mg/mL的轉(zhuǎn)染試劑的配制。

材料：

1g #23966、1L 純水（Milli-Q®純水，注射用水（WFI），或類似的生物級(jí)水）、12 M鹽酸、10 M氫氧化鈉、一次性0.1-0.2µm PES真空無(wú)菌過(guò)濾器、無(wú)菌高聚乙烯或聚丙烯試劑瓶。

器材：

1 L 玻璃燒杯、1 L玻璃量筒、核準(zhǔn)pH計(jì)、2支1 mL塑料移液管、托盤(pán)、聚四氟乙烯（PTFE）攪拌棒、真空泵

配制過(guò)程：

1g #23966——900mL水溶解——攪拌、加熱（60-80°C）——加HCl調(diào)pH到2.0左右——蓋上燒杯，攪拌3h（直至粉末*溶解）——冷卻至室溫——加NaOH調(diào)pH到6.9-7.1——移液到量筒，加水補(bǔ)足至1L——真空過(guò)濾消毒——分裝，-20°C保存。

備注：加熱或加酸都有助于PEI溶解。當(dāng)然酸可能不用加那么多，詳細(xì)用量可試加一點(diǎn)攪拌看看，足夠溶解就行，不一定需要加到pH那么低。

試劑儲(chǔ)存：

冷凍部分溶液可在-20°C保存長(zhǎng)達(dá)一年；部分解凍的溶液可在4°C保存2周，不可反復(fù)凍融。

粉末儲(chǔ)存：

未開(kāi)封的粉末有效期兩年。可在室溫下保存直至使用。

轉(zhuǎn)染操作流程：(瞬時(shí)轉(zhuǎn)染方法) 轉(zhuǎn)染效率（部分?jǐn)?shù)據(jù)參考，本數(shù)據(jù)來(lái)源于網(wǎng)絡(luò)，不作為售后投訴依據(jù)）

1. 接種細(xì)胞： 轉(zhuǎn)染前一天，用膠原酶（WORTHINGTONG 公司 LS004196)消化細(xì)

胞并計(jì)數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細(xì)胞濃度，將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿，每個(gè)孔置

入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到 70~80%。

2. 準(zhǔn)備 DNA-PEI 復(fù)合物： DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其

升至室溫。，用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他適合的無(wú)蛋白培養(yǎng)基稀釋適

量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線性 PEI 轉(zhuǎn)

染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液 的試管，一邊將稀釋的線性 PEI 轉(zhuǎn)染試劑滴

加至試管中（注意：請(qǐng)勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置 10~25 min 以

形成 DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí)，請(qǐng)用圓底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14

mL 離心管。

3. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞： 直接向每個(gè)孔中加入 DNA-PEI 復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在

無(wú)血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí)，去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基，替換成無(wú)血清培養(yǎng)基，然后滴 DNA-PEI 復(fù)

合物。轉(zhuǎn)染 3 h 后，添加½體積的包含 30%血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

4. 孵育細(xì)胞和分析結(jié)果： 在 CO2 培養(yǎng)箱中 37℃下孵育細(xì)胞至可以分析檢測(cè)。轉(zhuǎn)

染后快 的話7 h 即可檢測(cè)到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)。 請(qǐng)自行確定適合檢測(cè)時(shí)間。

細(xì)胞種類 中文名稱 PEI 轉(zhuǎn)染效率

HEK293 人胚腎細(xì)胞 90%-95%

293-T 人胚腎細(xì)胞 90%-95%

CHO-K1 倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞 80%-90%

U251 人源神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞 80%-90%

Hela 人源宮頸ai細(xì)胞 70%-80%

COS7 猴 SV40 轉(zhuǎn)化腎細(xì)胞 70%-80%

HepG2 人源肝癌細(xì)胞 70%-80%

NIH/3T3 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 60%-70%

膠質(zhì)瘤干細(xì)胞 人源膠質(zhì)瘤干細(xì)胞 60%-70%

Patu8988 人源胰腺癌細(xì)胞 60%-70%

U2OS 人源骨肉瘤細(xì)胞 60%-70%

轉(zhuǎn)染試劑和 DNA 配比數(shù)據(jù)

細(xì)胞型號(hào) 培養(yǎng)基 每孔細(xì)胞數(shù) DNA 的量 轉(zhuǎn)染試劑量 和培養(yǎng)基混合 4-6h

293H DMEM 3×10

4

0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS

293FT DMEM 3×10

4

0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS

293E DMEM 3×10

4

0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS

293F DMEM 3×10

4

0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS

COS7 DMEM 1.5×10

4

0.4µg 0.5µL DMEM+10%FBS

hela DMEM 2×10

4

0.3µg 0.5µL 1640+15%FBS

Caco2 MEM 3.5×10

4

0.3µg 0.75µL MEM+10%FBS

BHK21 MEM 2×10

4

0.2µg 0.5µL MEM+10%FBS

CHO-DG44 DMEM+HT+pro 2×10

4

0.5µg 0.5µL DMEM+HT+pro +10%FBS

RAW264.7 DMEM 3×10

4

0.2µg 0.5µL DMEM +10%FBS

MCF7

MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium

pyruvat

2×10

4

0.1µg 0.25µL

MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium

pyruvat+10%FBS

SW480 IMDM 3×10

4

0.4µg 0.5µL IMDM +10%FBS

MDCK DMEM 4×10

4

0.6µg 1µL DMEM+10%FBS

CHO-K1 IMDM+Pro 3×10

4

0.2µg 0.5µL IMDM+Pro +10%FBS

HepG2 DMEM 3×10

4

0.5µg 0.75µL DMEM+10%FBS

A549 DMEM 2×10

4

0.3µg 0.5µL DMEM+10%FBS

NIH/3T3 DMEM 1.5×10

4

0.1µg 0.75µL DMEM+10%FBS

vero DMEM 3×10

4

0.3µg 0.75µL DMEM+10%FBS

sf9 SIM SF 5×10

4

0.4µg 0.75µL SIM SF+10%FBS